孵育液中底物濃度理論上會抑制酶活性嗎?
孵育液一般均需新鮮配制、立即使用,否則會產(chǎn)生底物的非酶性分解而形成人工產(chǎn)物。孵育液中底物濃度理論上太高會抑制酶活性,但實踐中一般底物濃度是稍過量的。孵育液中捕捉劑濃度一般也比較高,但太高也會抑制酶活性。 另外,配制孵育液時,一些陰陽離子也是很重要的,它們參與酶促反應,并與形成的終反應產(chǎn)物有聯(lián)系。因此,孵育液中必須有合適的離子種類和濃度參與反應。孵育液要避免嚴重的高滲和低滲。配制孵育液時各物質(zhì)要充分溶解。 否則,各種成分的濃度會發(fā)生改變。溶解各種成分的順序,一般按照己定的順序進行。孵育反應適合于在振蕩式恒溫水浴箱中進行,孵育過程中不斷振蕩,使組織切片反應均勻完全,孵育液也易滲入組織內(nèi)部中。沒有振蕩式恒溫水浴箱時,在恒溫水浴箱中人工振蕩孵育液。
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